硫代硫酸钠溶液

【检验方法】（食品中大肠菌群的检测方法见 GB4789.3—2016）

1. 样品准备

1. 污水样品的采集和稀释

污水样品应至少取200mL，使用前应充分混匀。

根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确定污水样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的接种量一般为10mL、1mL、0.1mL（1:10稀释的1mL）。粪大肠菌群数较多时接种量为1mL、0.1mL（1:10稀释的1mL）、0.01mL（1:100稀释的1mL） 或 0.1mL（1:10稀释的1mL）、0.01mL（1:100稀释的1mL）、0.001mL（1:1000稀释的1mL） 等。

接种量少于1mL时，水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量为0.1mL、0.01mL

时，取稀释比分别为1:10、1:100。其它接种量的稀释比依此类推。

1:10 稀释样品的制作方法为：吸取1mL水样，注入到盛有9mL灭菌水的试管中，混匀，

制成1:10 稀释样品。因此，取1mL1:10稀释样品，等于取0.1mL污水样品。其它稀释比的

稀释样品同法制作。

注1：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。

1. 污泥样品的采集和稀释

污泥样品应至少取200g，使用前应充分混匀。

根据预计的污泥样品中粪大肠菌群数量确定污泥样品接种量。粪大肠菌群数量相对较

少的污泥样品接种量一般为0.1g、0.01g、0.001g。粪大肠菌群数量较多时接种量为0.01g、

0.001g、0.0001g 或0.001g、0.0001g、0.00001g 等。

污泥样品应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量0.1g、0.01g、0.001g 的稀释样

品制作方法如下：取20g 污泥样品，加入到三角烧瓶中，加灭菌水使成200mL，混匀，制成1:10 稀释样品。吸取1:10 稀释样品1mL，注入到盛有9mL灭菌水的试管中，混匀，制成1:100稀释样品。按同法制成1:1000 稀释样品。接种1mL1:10、1:100、1:1000 稀释样品等于接种0.1g、0.01g、0.001g 污泥样品。

注2：若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。

1. 接种标本和发酵试验

将样品接种于装有乳糖胆盐培养液的试管（内有小倒管）中，44℃培养24h。样品接种

体积以及管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积根据以下条件确定：

样品为污水时，取三个接种量、每个接种量的样品分别接种于5个试管内，共需15个试管。试管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积应根据接种量确定。若接种量为10mL，吸取10mL样品接种于装有5mL的 三倍浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量为1mL时，吸取1mL 样品接种于装有10mL 普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量少于1mL时，吸取1mL的稀释样品接种于装有10mL 普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内。

样品为污泥时，取三个接种量、每个接种量的稀释样品分别接种于3 个试管内，共需9个试管。 9个试管中，各装有10mL 乳糖胆盐培养液。各个试管接种稀释样品体积均为1mL。

1. 平板分离培养

大肠杆菌分解乳糖产酸时培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。经24h 培养后，将产酸的试管内培养液分别划线接种于伊红美蓝（EMB） 培养基上。置于37℃培养箱中，培养18～24h。

1. 鉴定

挑选可疑粪大肠菌群菌落，进行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有：1）深紫黑色，具有

金属光泽的菌落；2）紫黑色，不带或略带金屑光泽的菌落；3）淡紫红色，中心色较深的菌落。

上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取上述典型菌落1～3 个接种于

盛有5mL 乳糖蛋白胨培养液倒管和倒管的试管内，置于44℃培养箱中培养24h。产酸产气试管为粪大肠菌群阳性管。

1. 计数

根据证实有粪大肠菌群存在的阳性管数，查表A1（见GB18466-2005的A1表）或A2 （见GB18466-2005的A2表）可得100mL 污水或1g 污泥中粪大肠菌群MPN 值。

由于GB18466-2005中表A1 和表A2 是按一定的三个10 倍浓度差接种量设计的（污水接种量为10mL、1mL和0.1mL，污泥接种量为0.1g、0.01g 和0.001g），当采用其他三个10倍浓度差接种量时，需要修正表内MPN 值，具体方法如下：

表内所列污水（污泥）大接种量增加10倍时表内MPN值相应降低10倍；污水（污泥）大接种量减少10倍时表内MPN值相应增加10倍。如污水接种量改为1mL、0.1mL和0.01mL时，A1 表内MPN值相应增加10倍。其它的三个10倍浓度差接种量的MPN值相应类推。

由于A1表内MPN值的单位为每100mL污水样品中MPN值，而污水以1L为报告单位，因此需将查A1表得到的MPN值乘上10，换算成1L污水样品中的MPN值。

1. 检验结果报告

根据粪大肠菌群MPN值，报告1L污水或1g污泥样品中粪大肠菌群MPN 值。

注3：乳糖胆盐培养液和乳糖蛋白胨培养液的试管内有小倒管，如果在使用前小倒管内有空气，请将试管倒置轻轻摇动，使小倒管内的空气排出后方可使用。

注4：食品中大肠菌群的检测方法见 GB4789.3—2016