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三倍浓度乳糖胆盐培养液

三倍浓度乳糖胆盐培养液

更新时间:2020-09-28

厂商性质:生产厂家

生产地址:重庆市

产品报价:

产品特点:三倍浓度乳糖胆盐培养液含倒管,观察产气。用于污水、污泥、食品、水、乳制品、饮料和其它公共卫生检测等样本中粪大肠球菌群检验。

详细资料

【检验方法】(食品中大肠菌群的检测方法见 GB4789.3—2016

  1. 样品准备
  1. 污水样品的采集和稀释

污水样品应至少取200mL,使用前应充分混匀。

根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确定污水样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的接种量一般为10mL1mL0.1mL1:10稀释的1mL)。粪大肠菌群数较多时接种量为1mL0.1mL1:10稀释的1mL)、0.01mL1:100稀释的1mL 0.1mL1:10稀释的1mL)、0.01mL1:100稀释的1mL)、0.001mL1:1000稀释的1mL 等。

接种量少于1mL时,水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量为0.1mL0.01mL

时,取稀释比分别为1:101:100。其它接种量的稀释比依此类推。

1:10 稀释样品的制作方法为:吸取1mL水样,注入到盛有9mL灭菌水的试管中,混匀,

制成1:10 稀释样品。因此,取1mL1:10稀释样品,等于取0.1mL污水样品。其它稀释比的

稀释样品同法制作。

1:若样品为经过氯消毒的污水,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。

  1. 污泥样品的采集和稀释

污泥样品应至少取200g,使用前应充分混匀。

根据预计的污泥样品中粪大肠菌群数量确定污泥样品接种量。粪大肠菌群数量相对较

少的污泥样品接种量一般为0.1g0.01g0.001g。粪大肠菌群数量较多时接种量为0.01g

0.001g0.0001g 0.001g0.0001g0.00001g 等。

污泥样品应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量0.1g0.01g0.001g 的稀释样

品制作方法如下:取20g 污泥样品,加入到三角烧瓶中,加灭菌水使成200mL,混匀,制成1:10 稀释样品。吸取1:10 稀释样品1mL,注入到盛有9mL灭菌水的试管中,混匀,制成1:100稀释样品。按同法制成1:1000 稀释样品。接种1mL1:101:1001:1000 稀释样品等于接种0.1g0.01g0.001g 污泥样品。

2:若样品为经过氯消毒的污泥,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。

  1. 接种标本和发酵试验

将样品接种于装有三倍浓度乳糖胆盐培养液的试管(内有小倒管)中,44培养24h。样品接种

体积以及管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积根据以下条件确定:

样品为污水时,取三个接种量、每个接种量的样品分别接种于5个试管内,共需15个试管。试管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积应根据接种量确定。若接种量为10mL,吸取10mL样品接种于装有5mL 三倍浓度乳糖胆盐培养液的试管内;若接种量为1mL时,吸取1mL 样品接种于装有10mL 普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内;若接种量少于1mL时,吸取1mL稀释样品接种于装有10mL 普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内。

样品为污泥时,取三个接种量、每个接种量的稀释样品分别接种于3 个试管内,共需9个试管。 9个试管中,各装有10mL 乳糖胆盐培养液。各个试管接种稀释样品体积均为1mL

  1. 平板分离培养

大肠杆菌分解乳糖产酸时培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。经24h 培养后,将产酸的试管内培养液分别划线接种于伊红美蓝(EMB 培养基上。置于37培养箱中,培养1824h

  1. 鉴定

挑选可疑粪大肠菌群菌落,进行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有:1)深紫黑色,具有

金属光泽的菌落;2)紫黑色,不带或略带金屑光泽的菌落;3)淡紫红色,中心色较深的菌落。

上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌,则挑取上述典型菌落13 个接种于

盛有5mL 乳糖蛋白胨培养液倒管和倒管的试管内,置于44培养箱中培养24h产酸产气为粪大肠菌群阳性管

  1. 计数

根据证实有粪大肠菌群存在的阳性管数,查表A1(见GB18466-2005A1表)或A2 (见GB18466-2005A2表)可得100mL 污水或1g 污泥中粪大肠菌群MPN 值。

由于GB18466-2005A1 和表A2 是按一定的三个10 倍浓度差接种量设计的(污水接种量为10mL1mL0.1mL,污泥接种量为0.1g0.01g 0.001g),当采用其他三个10倍浓度差接种量时,需要修正表内MPN 值,具体方法如下:

表内所列污水(污泥)最大接种量增加10倍时表内MPN值相应降低10倍;污水(污泥)最大接种量减少10倍时表内MPN值相应增加10倍。如污水接种量改为1mL0.1mL0.01mL时,A1 表内MPN值相应增加10倍。其它的三个10倍浓度差接种量的MPN值相应类推。

由于A1表内MPN值的单位为每100mL污水样品中MPN值,而污水以1L为报告单位,因此需将查A1表得到的MPN值乘上10,换算成1L污水样品中的MPN值。

  1. 检验结果报告

根据粪大肠菌群MPN值,报告1L污水或1g污泥样品中粪大肠菌群MPN 值。

3:乳糖胆盐培养液和乳糖蛋白胨培养液的试管内有小倒管,如果在使用前小倒管内有空气,请将试管倒置轻轻摇动,使小倒管内的空气排出后方可使用。

4:食品中大肠菌群的检测方法见 GB4789.3—2016

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