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伊红美蓝(EMB)培养基

伊红美蓝(EMB)培养基

更新时间:2020-09-28

厂商性质:生产厂家

生产地址:重庆市

产品报价:

产品特点:当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色,再与美蓝结合形成紫黑色菌落,并带有绿色金属光泽。
在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色,伊红和美蓝不能结合,故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。
伊红美蓝(EMB)培养基用于污水、污泥、食品、水、乳制品、饮料和其它公共卫生检测等样本中粪大肠菌群检验。

详细资料

【预期用途】

用于污水、污泥、食品、水、乳制品、饮料和其它公共卫生检测等样本中粪大肠菌群检验。

【检验原理】

大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色,再与美蓝结合形成紫黑色菌落,并带有绿色金属光泽。

在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色,伊红和美蓝不能结合,故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。

【储存条件及有效期】

避光、2~8,有效期限为84d,具体详见产品包装上所示。

【样本要求】

将污水、污泥等标本接种于胆盐乳糖培养液培养后,取产酸、产气的试管内的培养液分别划线接种于伊红美蓝(EMB)培养基上   

【检验方法】食品中大肠菌群的检测方法见 GB4789.3—2016

  1. 样品准备
  1. 污水样品的采集和稀释

污水样品应至少取200mL,使用前应充分混匀。

根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确定污水样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的接种量一般为10mL1mL0.1mL1:10稀释的1mL)。粪大肠菌群数较多时接种量为1mL0.1mL1:10稀释的1mL)、0.01mL1:100稀释的1mL)或 0.1mL1:10稀释的1mL)、0.01mL1:100稀释的1mL)、0.001mL1:1000稀释的1mL)等

接种量少于1mL 时,水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量为0.1mL0.01mL时,取稀释比分别为1:101:100。其它接种量的稀释比依此类推。

1:10稀释样品的制作方法为:吸取1mL水样,注入到盛有9mL灭菌水的试管中,混匀,制成1:10稀释样品。因此,取1mL1:10稀释样品,等于取0.1mL污水样品。其它稀释比的稀释样品同法制作

1:若样品为经过氯消毒的污水,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。

  1. 污泥样品的采集和稀释

污泥样品应至少取200g,使用前应充分混匀。

根据预计的污泥样品中粪大肠菌群数量确定污泥样品接种量。粪大肠菌群数量相对较

少的污泥样品接种量一般为0.1g、0.01g、0.001g。粪大肠菌群数量较多时接种量为0.01g、

0.001g、0.0001g 或0.001g、0.0001g、0.00001g 等。

污泥样品应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量0.1g、0.01g、0.001g 的稀释样

品制作方法如下:取20g 污泥样品,加入到三角烧瓶中,加灭菌水使成200mL,混匀,制成

1:10 稀释样品。吸取1:10 稀释样品1mL,注入到盛有9mL 灭菌水的试管中,混匀,制成1:100

稀释样品。按同法制成1:1000 稀释样品。接种1mL1:10、1:100、1:1000 稀释样品等于接种0.1g、0.01g、0.001g 污泥样品。

2:若样品为经过氯消毒的污泥,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。

  1. 接种标本和发酵试验

将样品接种于装有乳糖胆盐培养液的试管(内有小倒管)中,44℃培养24h。样品接种体积以及管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积根据以下条件确定:

样品为污水时,取三个接种量、每个接种量的样品分别接种于5个试管内,共需15个

试管。试管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积应根据接种量确定。若接种量为10mL,吸取10mL

样品接种于装有5mL 的三倍浓度乳糖胆盐培养液的试管内;若接种量为1mL 时,吸取1mL 样品接种于装有10mL 普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内;若接种量少于1mL 时,吸取1mL 的稀释样品接种于装有10mL 普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内。

样品为污泥时,取三个接种量、每个接种量的稀释样品分别接种于3 个试管内,共需9个试管。9 个试管中,各装有10mL 乳糖胆盐培养液。各个试管接种稀释样品体积均为1mL。

  1. 平板分离培养

大肠杆菌分解乳糖产酸时培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。经24h 培养后,将产酸的试管内培养液分别划线接种于伊红美蓝(EMB)培养基培养基上。置于37℃培养箱中,培养1824h

  1. 鉴定

挑选可疑粪大肠菌群菌落,进行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有:1)深紫黑色,具有

金属光泽的菌落;2)紫黑色,不带或略带金屑光泽的菌落;3)淡紫红色,中心色较深的菌落。

上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌,则挑取上述典型菌落1~3 个接种于盛有5mL 乳糖蛋白胨培养液倒管和倒管的试管内,置于44℃培养箱中培养24h。产酸产气为粪大肠菌群阳性管

  1. 计数

根据证实有粪大肠菌群存在的阳性管数,查表A1 (见GB18466-2005的A1表)或A2 (见GB18466-2005的A2表)可得100mL 污水或1g 污泥中粪大肠菌群MPN 值。

由于GB18466-2005中表A1 和表A2 是按一定的三个10 倍浓度差接种量设计的(污水接种量为10mL、1mL和0.1mL,污泥接种量为0.1g、0.01g 和0.001g),当采用其他三个10 倍浓度差接种量时,需要修正表内MPN 值,具体方法如下:

表内所列污水(污泥)最大接种量增加10 倍时表内MPN 值相应降低10 倍;污水(污泥)最大接种量减少10 倍时表内MPN 值相应增加10 倍。如污水接种量改为1mL、0.1mL 和0.01mL时,A1 表内MPN 值相应增加10 倍。其它的三个10 倍浓度差接种量的MPN 值相应类推。

由于A1 表内MPN 值的单位为每100mL 污水样品中MPN 值,而污水以1L 为报告单位,因此需将查A1 表得到的MPN 值乘上10,换算成1L 污水样品中的MPN 值。

  1. 检验结果报告

根据粪大肠菌群MPN 值,报告1L 污水或1g 污泥样品中粪大肠菌群MPN 值。

3:乳糖胆盐培养液和乳糖蛋白胨培养液的试管内有小倒管,如果在使用前小倒管内有空气,请将试管倒置轻轻摇动,使小倒管内的空气排出后方可使用。

注4:食品中大肠菌群的检测方法见 GB4789.3—2016

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