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【预期用途】
用于污水、污泥中沙门氏菌、志贺氏菌的检测;
【检验原理】
三糖铁琼脂培养基(TSI)是一种复合培养基,根据细菌发酵乳糖、蔗糖和葡萄糖的能力以及是否产硫化氢,用以鉴别肠杆菌科细菌;
【储存条件及有效期】
避光、10~30℃,有效期限为12个月,具体详见产品包装上所示。
【样本要求】
用于检测污水、污泥滤膜截留物通过SF增菌液35±2℃,18~24h增菌后,接种至SS培养基、BS培养基和伊红美蓝琼脂平板(EMB);在SS培养基平板上呈无色透明或中间有黑心,直径1~2mm 的菌落;在BS 培养基平板上呈黑色的菌落或灰绿色的可疑肠道病原菌菌落;在伊红美蓝琼脂平板(EMB)上无色透明的菌落;
【检验方法】
取200mL 污水,用灭菌滤膜进行抽滤。用100mL 二倍浓度SF 增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱到灭菌三角烧瓶内,充公摇匀,置于37℃恒温培养箱,增菌培养12~24h。
注:若样品为经过氯消毒的污水,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
用灭菌匙称取污泥20g,放入灭菌容器内,加入200mL 灭菌水,充分混匀,制成1:10混悬液。吸取上述1:10 混悬液100mL,加入到装有100mL 二倍浓度SF 增菌液的已灭菌的三角烧瓶内,摇匀,置于37℃恒温培养箱,增菌培养24h。
注:若样品为经过氯消毒的污泥,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
2.1 取上述增菌培养液,分别接种于SS培养基平板和 BS培养基平板,置于37℃培养箱中,培养24~48h。观察各平板上生长的可疑菌落形态。
2.2 挑取在SS 培养基平板上呈无色透明或中间有黑心,直径1~2mm 的菌落;挑取在BS 培养基平板上呈黑色的菌落或灰绿色的可疑肠道病原菌菌落。每个平板最少挑取5 个菌落,接种于TSI 培养基和动力管(半固体琼脂培养基)中,置于37℃培养箱中,培养18~24h。
2.3 结果描述:在TSI 培养基中,如不发酵乳糖,发酵葡萄糖产酸产气或只产酸不产气,一般产生硫化氢,有动力者需做血清学试验和生化试验。
在TSI 培养基中,如不发酵乳糖,发酵葡萄糖产酸产气或只产酸不产气,通常产生硫化氢,有动力者,先与沙门氏A-F 群O 多价血清作玻璃片凝集,凡与多价O 血清凝集者,再与O 因子血清凝集,以确定所属群别,然后用H 因子血清,确定血清型。双向菌株应证实两相的H 抗原,有Vi 抗原的菌型(伤寒和丙型副伤寒沙门氏菌)应用Vi 因子血清检验。
应进行葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、靛基质、硫化氢、动力、尿素试验。沙门氏菌属中除伤寒沙门氏菌和鸡沙门氏菌不产气外,通过发酵葡萄糖、产气、均发酵甘露醇和麦芽糖(但猪沙门氏菌、雏沙门氏菌不发酵麦芽糖),不分解乳糖、蔗糖,尿素酶和靛基质为阴性,通常产生硫化氢。除鸡、雏沙门氏菌和伤寒沙门氏菌的O 型菌株无动力外,通常均有动力。如遇多价O 血清不凝集而一般生化反应符合上述情况时,可加做侧金盏花醇、水杨素试验,沙门氏菌均为阴性。
根据检验结果,报告一定体积的样品中存在或不存在沙门氏菌。
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