三糖铁琼脂培养基（TSI）

【预期用途】

用于污水、污泥中沙门氏菌、志贺氏菌的检测；

【检验原理】

 三糖铁琼脂培养基（TSI）是一种复合培养基，根据细菌发酵乳糖、蔗糖和葡萄糖的能力以及是否产硫化氢，用以鉴别肠杆菌科细菌；

【储存条件及有效期】

避光、10~30℃，有效期限为12个月，具体详见产品包装上所示。

【样本要求】

用于检测污水、污泥滤膜截留物通过SF增菌液35±2℃，18~24h增菌后，接种至SS培养基、BS培养基和伊红美蓝琼脂平板（EMB）；在SS培养基平板上呈无色透明或中间有黑心，直径1～2mm 的菌落；在BS 培养基平板上呈黑色的菌落或灰绿色的可疑肠道病原菌菌落；在伊红美蓝琼脂平板（EMB）上无色透明的菌落；  

【检验方法】

1. 样品处理和增菌

1. 污水

取200mL 污水，用灭菌滤膜进行抽滤。用100mL 二倍浓度SF 增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱到灭菌三角烧瓶内，充公摇匀，置于37℃恒温培养箱，增菌培养12～24h。

注：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。

1. 污泥

用灭菌匙称取污泥20g，放入灭菌容器内，加入200mL 灭菌水，充分混匀，制成1：10混悬液。吸取上述1：10 混悬液100mL，加入到装有100mL 二倍浓度SF 增菌液的已灭菌的三角烧瓶内，摇匀，置于37℃恒温培养箱，增菌培养24h。

注：若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。

1. 平板分离

2.1  取上述增菌培养液，分别接种于SS培养基平板和 BS培养基平板，置于37℃培养箱中，培养24～48h。观察各平板上生长的可疑菌落形态。

2.2  挑取在SS 培养基平板上呈无色透明或中间有黑心，直径1～2mm 的菌落；挑取在BS 培养基平板上呈黑色的菌落或灰绿色的可疑肠道病原菌菌落。每个平板最少挑取5 个菌落，接种于TSI 培养基和动力管（半固体琼脂培养基）中，置于37℃培养箱中，培养18～24h。

2.3  结果描述：在TSI 培养基中，如不发酵乳糖，发酵葡萄糖产酸产气或只产酸不产气，一般产生硫化氢，有动力者需做血清学试验和生化试验。

1. 鉴定

1. 血清学试验

在TSI 培养基中，如不发酵乳糖，发酵葡萄糖产酸产气或只产酸不产气，通常产生硫化氢，有动力者，先与沙门氏A-F 群O 多价血清作玻璃片凝集，凡与多价O 血清凝集者，再与O 因子血清凝集，以确定所属群别，然后用H 因子血清，确定血清型。双向菌株应证实两相的H 抗原，有Vi 抗原的菌型(伤寒和丙型副伤寒沙门氏菌)应用Vi 因子血清检验。

1. 生化试验

应进行葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、靛基质、硫化氢、动力、尿素试验。沙门氏菌属中除伤寒沙门氏菌和鸡沙门氏菌不产气外，通过发酵葡萄糖、产气、均发酵甘露醇和麦芽糖(但猪沙门氏菌、雏沙门氏菌不发酵麦芽糖)，不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基质为阴性，通常产生硫化氢。除鸡、雏沙门氏菌和伤寒沙门氏菌的O 型菌株无动力外，通常均有动力。如遇多价O 血清不凝集而一般生化反应符合上述情况时，可加做侧金盏花醇、水杨素试验，沙门氏菌均为阴性。

1. 检验结果报告

根据检验结果，报告一定体积的样品中存在或不存在沙门氏菌。