改良真菌药敏培养基

【预期用途】
改良真菌药敏培养基用于真菌的纸片扩散法药物敏感实验。
【检验原理】
在改良真菌药敏培养基表面涂抹接种上细菌，然后贴上一定含量抗真菌药物的纸片，再在特定条件下经过孵育。由于纸片中所含抗真菌药物对细菌不同程度，不同圆形纸片周围会出现直径大小不同的圆形的无菌生长区域——称为“抑菌圈”。量取抑菌圈直径（㎜），对照实验室所参照的判读标准，得出被测细菌对被测抗真菌药物的药物敏感试验结果是“敏感”、“中介”还是“耐药”。
【样本要求】
分离纯化的真菌菌株，选自念珠菌显色培养基上或非选择性马铃薯葡萄糖培养基上孵育 20～24 h 的纯化菌株，菌落特征典型。
【检验方法】
1.  试验应严格遵守无菌操作， 防止微生物污染；
2.  接种物制备——直接菌落悬液法
1)  从孵育 20～24 h 的琼脂平板（应选用念珠菌显色培养基上或非选择性马铃薯葡萄糖培养
基）上挑取数个单个菌落，直接在 3 mL 的生理盐水中制成菌悬液；
2)  调整菌悬液的浊度使其相当于 0.5 麦氏浓度[（1～2）×10 8  CFU/mL]。肉眼观察，应在足
够的光线下，贴靠着有黑白相间粗线条的比色卡与 0.5 麦氏浓度标准管进行比较。
3.  接种平板
1)  平板的准备：35±2℃孵箱，平板正放，皿盖半开，放置约 20～30 min，使其恢复至室温
并使琼脂表面冷凝水干掉；
2)  调整好菌悬液的浊度后，在 15 min 内将无菌棉签浸入菌悬液内。紧贴试管内壁在液体上
方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体；
3)  用拭子横划线接种整个表面干燥的琼脂表面；然后再旋转平板约 60º，再次用拭子横划线
接种；如此两次，亦即从 3 个方向（60º）用棉签划线接种琼脂表面，以确保每次接种均
匀分布，后在琼脂平板的边缘涂抹一圈；
4)  盖子可半开 3～5 min，以使琼脂吸收表面多余的水分，在 15 min 内贴完药敏试验纸片。
4.  纸片在已接种的琼脂平板上的位置
1)  将预先设定的一组抗菌药物纸片分置在已接种细菌的琼脂表面，每个纸片必须压下以确保
与琼脂表面完全接触，无论是单独放置的纸片或有纸片分配设备，纸片必须分布均匀，两
纸片之间圆心的距离不少于 24 ㎜。90 ㎜的平板放置不超过 4 个纸片。但对于一些药物产
生的抑菌环很大，在一个琼脂板内仅放置 2～3 个纸片。注意纸片距离琼脂边缘的距离同
样重要，无论有多少纸片，如果纸片放置得太靠近琼脂的边缘（≥10 ㎜），一些药物的
抑菌环可能会不完整，由于一些药物几乎是瞬间扩散的，一旦纸片与琼脂表面接触，就不
能再移动，如位置不佳可在琼脂的另一个位置重新放置一个纸片；
2)  在放置好纸片后 15 min 内倒置琼脂板并将它放置在 35±2℃的孵箱中，需氧孵育 20～24 h。